Una rápida disminución de la diversidad de especies de anfibios que se ha producido en todo el mundo en las últimas décadas requiere medidas de conservación inmediata y eficientes. La rana arbórea coronada (Anotheca spinosa). La especie está siendo afectada por el hongo causante de la quitridiomicosis (Bd). Los bancos genómicos (GRB) funcionan como pólizas de seguro para las especies en peligro Los GRB se pueden utilizar para almacenar germoplasma de poblaciones amenazadas, con la intención deliberada de utilizarlos en un programa de reproducción en el futuro. El objetivo de este estudio es desarrollar un protocolo de estimulación hormonal y criopreservación de esperma para la conservación de la Rana Coronada (Anotheca spinosa). Se aplicó la estimulación hormonal en 35 machos de A. spinosa. Los tratamientos fueron aplicados vía intraperitoneal. Se tomaron muestras de 8 individuos por tratamiento. La colecta de la orina espermática se llevó a cabo insertando un catéter en la cloaca. Para establecer las curvas de concentración espermática y los picos de producción para cada hormona, las muestras fueron colectadas 0.5, 1.5, 2.5, 3.5, 4.5, 5.5, 6.5, 24, 28 y 48 h post-estimulación. Los tratamientos hormonales utilizados fueron: 1, 2 o 4 μg/gpc del agonista de la hormona liberadora de la gonadotropina GnRH-des- Gly10, D-Ala6 , Pro-NHEt9; 5 y 10 IU/gpc hormona gonadotrópica humana (hCG). Como controles se utilizó orina obtenida sin estimulación hormonal y controles de orina de animales inyectados con Amphibian Ringer Solution (ARS). Para cada una de las colectas se procedió a evaluar la calidad espermática en términos de concentración, osmolalidad, pH, volumen, porcentaje de motilidad, porcentaje de movimiento progresivo y morfología). Los resultados indican que para la especie A. espinosa todos los tratamientos hormonales estimularon la producción de esperma, sin embargo, los tratamientos con 1 y 4 μg/gpc GnRH no fueron diferentes a los controles.